每個ELISA試驗都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線，實驗新手剛接觸ELISA實驗的時基本上都是不知所措，尤其是實驗做完后需要分析數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖更是茫然。鑒于經(jīng)常有實驗新手客戶向我司技術(shù)部反映標(biāo)準(zhǔn)曲線圖繪制問題，歐陽技術(shù)根據(jù)自身多年的工作經(jīng)驗詳細(xì)整理了繪制標(biāo)曲的步驟流程，供廣大新老客戶參考。
1、擬和曲線：
輸入先進行： 濃度值， 如0 10 50 100 400
輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42
選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進入圖表向?qū)В凇皹?biāo)準(zhǔn)類型"中選擇“xy散點圖"；在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖"，按“下一步"；選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步"；數(shù)據(jù)標(biāo)志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值；數(shù)據(jù)x軸，濃度；按下一步，點擊完成。可得曲線圖。
單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線"，在類型中，選擇多項式；在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。
2、計算濃度：
*次實驗：
標(biāo)準(zhǔn)曲線為：
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
為例，已知OD值，計算濃度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x，所以可以得到：
4E-05x2 －0.026x ＋y＝0
ax2 ＋bx ＋y＝0
a＝4E-05；b＝ －0.026；
x＝（－b－（b*b－4ay）（平方根）） /（2*a）
代入a，b，和y值，得
x＝（0.026－（0.026*0.026-0.00016*y）（平方根））/（2*0.00004）
在excel里可以用以下公式表示：
x＝（0.026-EXP（LN（0.026*0.026-0.00016*y）/2））/（2*0.00004）
通用公式為：
x＝（－b－EXP（LN（b*b－4ay）/2））/（2*a）
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